文章摘要:背景：在辅助生殖工作中，玻璃化二次冷冻可以有效提高胚胎利用率。课题组前期研究结果显示，不同发育时期的玻璃化二次冷冻显著影响胚胎发育，但其机制尚不明确。目的：探讨不同时期玻璃化二次冷冻影响胚胎发育潜力的可能机制。方法：收集ICR小鼠体内受精的2-细胞胚胎并进行体外培养，随机分为4组：对照组、8-细胞冷冻一次组（8C）、8-细胞冷冻一次解冻后于8-细胞期（8C-8C）或培养至囊胚期（8C-BL）再次冷冻。利用免疫荧光分析囊胚期H3K4me3、H3K9me2及H3K9AC的表达水平；实时荧光定量PCR分析多能性基因Cdx2、Oct4及Sox2的转录水平。结果与结论：（1）免疫荧光结果显示，一次和二次冷冻均会导致囊胚期H3K9me2 （P <0.01）及H3K9AC水平显著上升（P <0.000 1）;（2）一次冷冻不影响H3K4me3水平，但二次冷冻组H3K4me3水平显著下降，且在8C-BL组下降尤为严重（P <0.000 1）;（3）实时荧光定量PCR结果显示，一次冷冻及8-细胞期二次冷冻不会影响胚胎多能性基因Cdx2、Oct4和Sox2的表达水平，但8C-BL组胚胎多能性基因表达水平显著改变，Oct4的表达水平显著下降（P <0.01），而Cdx2 （P <0.001）和Sox2 （P <0.01）的表达水平显著上升；（4）结果表明，玻璃化二次冷冻对小鼠胚胎的表观遗传具有一定的负面影响，且囊胚期二次冷冻显著影响H3K4me3修饰及多能性相关基因表达水平。

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